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浙江飞鱼彩票:浅谈体内哺乳动物红细胞微核实验的疑难点

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2018/07/05
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浅谈体内哺乳动物红细胞微核实验的疑难点

西安国联质量检测技术股份有限公司

安评中心:闫敏

      本人长时间从事毒理学研究和安全评价工作,主要负责一般毒理和遗传毒理,微核试验属于遗传毒理实验中的一项重要研究,在不断的摸索和实验过程中,总结了几点经验和摸索出的关键点并做以下讨论:
      红细胞微核实验经过前几次的失败,总结了存在的问题和可能的影响因素如下:
    1.阳性结果不明显
      阳性对照使用环磷酰胺,环磷酰胺的水溶液不稳定,配制好后2-3h后有可能就会失效,并且要避光2-8℃保存。有时候实验使用的阳性对照溶液配制时间过长,可能已经失效。一般的阳性对照组溶液均为现配现用,不宜长时间放置,容易变质。
    2.取材,制片过程存在问题
    a.取骨髓时,肌肉组织未完全剥离,导致挤出骨髓时所含杂质太多;可以用纱布进行擦拭并剔除多余组织和肌肉,得到干净的股骨;
      b.取骨髓的方式有两种,用止血钳挤或者用注射器捅出骨髓,但是两种方法都不能将股骨损坏,导致取出量少,没有代表性,用小牛血清推片后,镜下阅片细胞量很少,达不到阅片效果。止血钳挤骨髓:剪去股骨大骨一端,用止血钳平行夹住股骨,然后轻轻挤压,骨髓会像牙膏一样挤出来,然后放在玻片上。注射器捅骨髓:剪去股骨两端,用镊子镊住股骨,置于小牛血清上,用注射器来回捅骨髓腔,让骨髓释放在血清中,混匀,推片。
    c.推片方法:推片一定要和玻片呈角度,一般为45°,推片向内侧倾斜,向外推片,使小牛血清平铺在载玻片面上。
    3.染色问题
    a.染液配比浓度高,染色时间过长。一般可采用1:9的比例来配制姬姆萨染液,染色10min,染液使用的PBS缓冲液的ph很重要,保持在6.8,ph偏酸或者偏碱都有可能导致红细胞染色效果不好,无法分辨成熟红细胞和嗜多染红细胞。
    b.冲洗染液时一定要彻底,及时,不能让染液残留较多。用流水沿玻片磨砂端冲洗,直至洗出的流水为无色。
    以上是在做红细胞微核试验时遇见并解决的问题,科研实验和研究就是在不断的失败和改正中获得成功。

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[ 来源:西安国联质量检测技术股份有限公司 ]

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